欧亿体育用户最开始没有用二氯甲烷冲洗，后来听Waters的技术和其他同行介绍说做完实验以用二氯甲烷冲洗一下，可以去色谱柱里的蛋白质，刚开始（用的是天津某品牌的二氯甲烷）压力是正常的，3个月后(改用我们的二氯甲烷)压力从开始的100多psi升到2000psi，后来压力太高把色谱柱PEEK接头裂开了，就用0.2ml的甲醇冲了一晚上，压力还是在3300Psi，色谱柱严重堵塞。
请大家帮忙分析下有哪些原因导致用二氯甲烷冲洗色谱柱后柱压上升了？另外，做防腐剂山梨酸、苯甲酸、糖精钠等的C18柱的使用寿命一般有多长？（ps：我听说这个实验很废色谱柱的，因为在前面处理沉淀蛋白过程中需要加入乙酸铅或者乙酸锌+亚铁，请大家帮忙分析下导致色谱柱柱压上升的原因）。
个人觉的冲了甲醇以后，直接换到二氯甲烷问题多多，甲醇和二氯甲烷虽然是互溶的，但溶解性比较差，正确的应该是甲醇冲了以后--异丙醇过渡--二氯甲烷冲洗--异丙醇过渡---甲醇冲洗
Waters专家应该不会连这样的常识都不知道，个人倾向客户可能忘记了异丙醇过渡的步骤了赞贴0收藏0拍砖0举报reagentlife精华
不知道样品中的蛋白质有多少，如果很多的话，二氯甲烷和蛋白质会发生质变，估计这根柱子已经用不成了。
1， 如果是很微量的蛋白质的话， 以下这个步骤结束后就可以了。因为很微量蛋白质不会造成很大的影响。
[ 95%水/5%甲醇（1ml/min，冲洗1小时）冲洗完后，再用100%甲醇（1小时）冲洗，保存。]
但是，使用碱性溶剂的话，pH会增高，柱子是ODS的话，硅胶也会随之融化，导致柱子受损。
2） 使用高浓度的缓冲溶剂。 比如； 1mol的盐类 之后使用100%水 =〉 50% 有机溶剂 -〉100% 有机溶剂 保存。
常理上来讲，如果目的样品不是蛋白质的话，在进LC之前，前处理的时候会除去蛋白质。
但是由于二氯甲烷具有挥发性，所以清洗之后需要使用中性溶剂来置换，比如；100% 的IPA (异丙醇） -〉 100% 甲醇 保存。
这个溶剂少量的用不是不可以，但所以接头都得是不锈钢的。PEEK的切忌用含卤素的溶剂。
